Kit de miniprep ecológico
El miniprep que une lo mejor de ambos mundos
MX$2999.00
Descubre el kit de miniprep ecológico, diseñado para realizar hasta 200 reacciones de manera eficiente y sostenible. Este innovador kit no solo es rápido y económico, sino que también contribuye activamente al cuidado del medio ambiente al reducir el uso de plásticos y residuos en tu laboratorio. Perfecto para investigadores comprometidos con la ciencia y la ecología, su formato compacto y ligero facilita el almacenamiento a temperatura ambiente.
Este protocolo permite aislar ADN plasmídico de cultivos de E. coli mediante el método clásico de lisis alcalina, optimizado para obtener alto rendimiento y pureza sin necesidad de columnas.
⚠️ Se recomienda seguir cada paso con cuidado, ya que un manejo brusco puede fragmentar el ADN plasmídico.
🔹 Antes de comenzar
Cuando abras tu kit, realiza las siguientes preparaciones iniciales:
Agrega 100 mL de isopropanol grado biología molecular distribuidos en dos botellas de 50 mL (ya incluidas en el kit).
Reconstituye la lisozima: agrega 1 mL de Buffer Lisozima (incluido) al vial con lisozima liofilizada. Una vez disuelta, almacena a 4 °C.
Agrega 40 mL de etanol grado biología molecular a cada frasco de Solución de Lavado (vienen dos incluidos).
Guarda ambos frascos de Solución 1 en refrigeración (4 °C).
🔹 Antes de cada uso
➤ Preparación de la Solución 1 con lisozima
Nº de reacciones | Lisozima a agregar |
|---|---|
1 | 20 µL |
2 | 40 µL |
3 | 60 µL |
4 | 80 µL |
5 | 100 µL |
10 | 200 µL |
💡 Usa siempre Solución 1 fría y prepara únicamente la cantidad que necesites.
➤ Preparación de la Solución 2
Nº de reacciones | Volumen final (µL) | Solución 2A (µL) | Solución 2B (µL) |
|---|---|---|---|
1 | 400 | 200 | 200 |
2 | 800 | 400 | 400 |
3 | 1 200 | 600 | 600 |
4 | 1 600 | 800 | 800 |
5 | 2 000 | 1 000 | 1 000 |
10 | 4 000 | 2 000 | 2 000 |
⚠️ Prepara la Solución 2 justo antes de usarla. La mezcla es estable durante unas horas a temperatura ambiente.
🔬 Procedimiento
1️⃣ Cultivo bacteriano
Inicia con una colonia individual de E. coli transformada con tu plásmido.
Incuba en 4 mL de medio LB (u otro apropiado) con el antibiótico de selección correspondiente.
Incuba toda la noche a 37 °C con agitación.
2️⃣ Cosecha de bacterias
Centrifuga el cultivo a 12 000 rpm durante 1 min a temperatura ambiente.
El pellet obtenido contiene las bacterias.
💡 Si necesitas detenerte, puedes conservar el pellet a –20 °C hasta continuar.
3️⃣ Resuspensión y digestión de la pared celular
Resuspende el pellet en 200 µL de Solución 1 (ya con lisozima).
Incuba a 37 °C por 5 min.
4️⃣ Lisis alcalina
Agrega 400 µL de Solución 2 recién preparada.
Mezcla suavemente invirtiendo el tubo 4–6 veces.
⚠️ No uses vortex: el ADN plasmídico puede romperse por cizallamiento.
5️⃣ Neutralización
Agrega 200 µL de Solución 3, mezcla con la pipeta y coloca el tubo en hielo por 5 min.
👉 Se formará un precipitado blanco (ADN genómico, proteínas y detergente).
💡 El ADN plasmídico permanece soluble en el sobrenadante.
6️⃣ Clarificación
Centrifuga a 12 000 rpm por 10 min.
Transfiere el sobrenadante claro a un tubo limpio sin arrastrar el pellet blanco.
Si ves residuos, repite la centrifugación.
7️⃣ Precipitación del ADN plasmídico
Al sobrenadante agrégale 0.5 mL de isopropanol.
Mezcla suavemente e incuba 10 min a temperatura ambiente.
8️⃣ Recolección del ADN
Centrifuga nuevamente (como en el paso 6) y descarta el sobrenadante.
💡 El ADN plasmídico está precipitado en el pellet (aunque puede no ser visible).
9️⃣ Lavado del ADN
Lava el pellet con 500 µL de Solución de Lavado.
Invierte el tubo para enjuagar bien las paredes.
Centrifuga a 12 000 rpm por 5 min, retira el etanol y seca el pellet a 50 °C por 10 min (por ejemplo, en un thermoblock).
🔟 Resuspensión y digestión de RNA
Resuspende el pellet de ADN en 30–50 µL de Solución de Elusión.
💡 El plásmido está listo para cuantificación o digestión enzimática.
✅ Notas finales
El ADN obtenido es apto para digestión, PCR, secuenciación y transfección.
A260/280 esperado: ≈ 1.8
A260/230 esperado: 2.0–2.3
